对硝基苯酯磷酸酯,10ML,487663-10MLCN,Sigma

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品牌型号 Sigma 487663-10MLCN
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产品介绍 Product Description

General description

硝基苯基磷酸酯以50X浓缩液(0.19 mol/l)的形式提供。与-NPP 底物缓冲液(货号 487664)一起使用。
对硝基苯基磷酸酯是基于碱性磷酸酶的 ELISA 测定中最常见的底物。磷酸酯水解释放出硝基苯酚,它是一种可溶的黄色色原体,可在 405 nm(ε= 1.83 x 104M-1cm-1)以分光光度法测定。由于反应是线性的,因此可以进行动力学分析。终点的确定也可以通过用强碱终止反应并测量 405 nm 处的吸光度来进行。这种p-NPP 制剂是一种在专有溶剂中的稳定、便捷的液体浓缩物。
基于碱性磷酸酶的ELISA分析的出色底物。产生黄色可溶成品,可在405 nm至410 nm处读取。可以进行动力学和终点测定。以即用型产品提供。可单独购买的即用型稀释剂(货号487664)。
这种对-硝基苯基磷酸酯经过验证可用于 ELISA。


Application

ELISA


Biochem/physiol Actions

主要靶标
基于碱性磷酸酶的ELISA分析的底物。
产物不与ATP竞争。


Physical form

以 50X 浓缩液形式提供。


Preparation Note

如果溶液变为黄色或浑浊,则丢弃。


Other Notes

通过ELISA对最终产品进行产品测试。



在基于碱性磷酸酶的 ELISA 中使用p-NPP的建议程序:



1。 制备1X p-NPP 底物溶液: 向 39 份 dH2O 中加入 1 份 50X p-NPP 浓缩液和 10 份 p-NPP 底物缓冲液(货号 487664)。混匀并避光储存。这种稀释的试剂在制备后可稳定达10 小时



注:货号 487664 是一种基于 AMP(2-氨基-2-甲基-1-丙醇)的缓冲液。其它缓冲液,例如基于二乙醇胺(DEA)和基于2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇(AMPD)的缓冲液,也可以使用。



2.用抗体和碱性磷酸酶标记的探针完成所有要求的培养。

3.用含有0.1%吐温®-20洗涤剂的Tris缓冲盐水(TBS)清洗板孔至少4次。 不要使用磷酸盐缓冲液; 无机磷酸盐是碱性磷酸酶的强效抑制剂。

4.**一次洗涤后,振摇并吸干孔中的全部残留缓冲液。

5.向每个孔中加入 100 µl 1X p-NPP 底物溶液(在步骤 2 中制备)并培养 15-60 分钟。 (如果需要进行动力学研究,可以按一定时间间隔获取 405 nm 的读数)。



[注意:**培养时间可能因酶的含量而异。如果显色过快,可能需要稀释探针、抗体或碱性磷酸酶标记的试剂。]



6.添加100 µl 1 N NaOH终止反应。

7.读取 405 nm 处的吸光度。



注:时间、试剂体积和温度的变化可能需要用户进一步标准化。


Legal Information

CALBIOCHEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
TWEEN is a registered trademark of Croda International PLC


Disclaimer

毒性:标准处理(A)


技术参数 Specifications
Quality Level100
formliquid
does not contain preservative
manufacturer/tradenameCalbiochem®
storage conditionOK to freeze,protect from light
colorclearslightly yellow tint
shipped inambient
storage temp.2-8°C
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高度(mm)
重量(kg)
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