SP6 RNA聚合酶，5000UNITS，11487671001，Roche

General description

利用该系统能够获得均匀标记的单链RNA。转录物可以用生物素或DIG-11-UTP标记，或者使用[α-³²P]或[α-³⁵S]标记的核苷酸进行放射性标记，以获得高比活性。

内容物：

• SP6 RNA聚合酶，≥20 U/μl，溶于缓冲液，pH 7.9
• 转录缓冲液，10倍浓缩

Application

SP6 RNA聚合酶能够以转录SP6启动子下游的克隆DNA为模板，转录合成相应的RNA。可以用标记的NTP进行合成，获得高度标记的RNA。合成的RNA可用于许多应用，包括：

• RNA或DNA印迹技术
• 原位 杂交
• RNA酶保护研究：由酶合成的转录物可用作前体RNA，以研究RNA剪接和加工。
• 在转录反应期间，通过在GTP或ATP上过量添加m7GpppG或m7GpppA而在 体外 合成加帽RNA。将得到的反义RNA引入细胞，可抑制相应基因的表达。
• 合成反义RNA探针

Biochem/physiol Actions

启动子特异性

SP6 RNA聚合酶具有极强的启动子特异性，仅转录噬菌体SP6 DNA或SP6启动子下游的克隆DNA（例如pSPTBM20；pSPTBM21）。

热灭活：通过加入 2 μl 0.2 M EDTA（pH 8.0）和/或加热至65℃来终止反应。

Features and Benefits

杂交探针的合成： SP6 RNA聚合酶能够高效生产均匀标记的RNA。这种标记RNA可用作Southern、Northern和斑点印迹以及原位杂交的杂交探针。
合适的标记物：转录物可以用生物素-16-UTP、DIG-11-UTP或荧光素-12-UTP进行非放射性标记。还可以用 [a-³²P]- 或[a-³⁵S]-标记的核苷酸进行放射性标记，以获得高比活性。

注意：罗氏拥有10倍浓缩的RNA标记混合物，专为DIG-、生物素和荧光素标记而设计。这些混合物与SP6 RNA聚合酶配合良好。

Preparation Note

活化剂：BSA/精胺
保存于密闭容器内，置于干燥通风处

Analysis Note

测试缓冲液
40 mM Tris-HCl，pH 8.0 (+20°C)，6 mM MgCl₂，10 mM二硫苏糖醇，2 mM亚精胺，pH约为8.0 (+20°C).
无核酸内切酶
1.将1 μgλDNA和SP6 RNA聚合酶溶于25μl测试缓冲液，在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表无λDNA降解。
2.将1 μg λDNA的Eco RI/Hind III片段与SP6 RNA聚合酶溶于25μl测试缓冲液，在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表带型无变化。
无切割活性
将1 μg pBR322 DNA和SP6 RNA聚合酶溶于25μl测试缓冲液，在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表无超螺旋结构解旋。
无RNA酶
将4 μg MS2 RNA和SP6 RNA聚合酶溶于50μl测试缓冲液，在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表无MS2 RNA降解。
在转录分析中的性能
使用SP6/T7转录试剂盒（目录号10 999 644 001）对SP6 RNA聚合酶进行功能测试。使用0.5 μg pST18 neo DNA进行标准检测，用Eco RI酶切并使用50 mCi [alpha-³²P] CTP, [400 Ci/mmol (15 TBq/mmol)]标记，20分钟内的掺入率给出>50%的输入放射性。

Other Notes

一个酶活性单位是在+37°C下，在60分钟内向酸可沉淀的RNA产物中掺入1 nmol CMP所需的酶活性。

体积活性：≥20 U/μl
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。