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General description
可识别~90 kDa（表观分子量）MDM2蛋白。也可通过免疫印迹识别~57 kDa和~74/76 kDa的亚型。
纯化的小鼠单克隆抗体（参见应用参考文献）。可识别~90 kDa（表观分子量）MDM2蛋白。也可识别~57和~74/76 kDa的亚型。
该抗MDM2（Ab-1）小鼠mAb（IF2）经验证可用于冰冻切片、免疫印迹、免疫荧光、免疫沉淀、石蜡切片中检测MDM2（Ab-1）。
Immunogen
人
人MDM2
表位：人MDM2的氨基酸26-169内
Application
冰冻切片（1-5 µg/ml，见应用参考文献）
免疫印迹（0.5-2 µg/ml，化学发光）
免疫荧光（1-5 µg/ml）
免疫沉淀（1 µg/样品）
石蜡切片（1-5 µg/ml，需要加热预处理，见应用参考文献）
Packaging
请参考特定浓度批号的标签。
Physical form
溶于50 mM磷酸钠缓冲液，含0.2％明胶。
Analysis Note
阳性对照
OSA-CL细胞
Other Notes
Gorgoulis, V.G., et al. 1996.J. Pathol.180, 129.
Marchetti, A., et al. 1995.J. Pathol.175, 31.
Barak, Y., et al. 1993.EMBO J.12, 461.
Ladanyi, M., et al. 1993.Cancer Res.53, 16.
Leach, F.S., et al. 1993.Cancer Res.53, 2231.
Oliner, J.D., et al. 1993.Nature362, 857.
Momand, J., et al. 1992.Cell69, 1237.
Oliner, J.D., et al. 1992.Nature358, 80.
Fakharzadeh, S.S., et al. 1991.EMBO J. 10, 1565.
尽管MDM2的氨基酸序列预测蛋白质分子量约为54 kDa，但MDM2蛋白质在SDS/PAGE上迁移的表观迁移率为90 kDa。
免疫印迹方案
MDM2（Ab-1）可用于通过蛋白质印迹法检测MDM2，该蛋白质先前已通过SDS/PAGE分离并电泳转移到硝酸纤维素膜上。蛋白质与单克隆抗体反应，并使用HRP标记的山羊抗小鼠抗体和化学发光检测进行可视化。
材料
设备：
•电泳仪
• 电印迹仪
• Rocker platform
溶液和试剂
• 抗-MDM2（Ab-1）小鼠mAb（IF2）目录编号OP46或OP46T
• HRP偶联山羊抗小鼠IgG重链和轻链（例如目录编号401215）
• 化学发光检测系统
• ELB缓冲液（包括蛋白酶抑制剂混合物，例如0.5 µg/ml亮肽素, 1 µg/ml胃酶抑素， 1 mM EDTA和0.2 mM PMSF）：50 mM Hepes pH 7.0，250 mM NaCl，0.5 mM EDTA，0.1% Nonidet P-40替代物
• SDS-PAGE（7%丙烯酰胺）
• 磷酸盐缓冲盐水（PBS）pH 7.4；1升：0.2 g KCl，0.2 g KH2PO4，8 g NaCl，1.15 g Na2HPO4
• PBS/0.1% Tween®-20洗涤剂（PBST）
• PBST中3%脱脂奶粉的
程序
1.在ELB缓冲液中裂解细胞。（或者，细胞可以在RIPA缓冲液中裂解或直接在1X Laemmli样品缓冲液中裂解）。
2.使用7%丙烯酰胺凝胶电泳50-100 µg裂解物。
3.使用电印迹仪将蛋白质样品从聚丙烯酰胺凝胶转移到硝酸纤维素膜上。
4.室温下通过摇摆将膜在含3%脱脂奶粉的PBST中封闭1 h。使用约1 ml/cm2的膜。
5.将膜与溶于3%脱脂奶粉/PBST中的1 µg/mL抗MDM2（Ab-1）小鼠mAb（IF2）在室温下摇晃孵育1小时。
6.室温下在PBST中摇动洗涤膜3次，每次15分钟。
7.将膜与HRP标记的山羊抗小鼠IgG重链和轻链抗体（根据供应商’说明稀释）在3%脱脂奶粉/PBST中于室温下孵育1小时。
8.室温下在PBST中摇动洗涤膜4次，每次15分钟。
9.根据生产商的说明，使用化学发光检测试剂显影膜。
10.将膜暴露于膜10分钟。根据需要调整后续暴露时间。
Legal Information
CALBIOCHEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
TWEEN is a registered trademark of Croda International PLC
Disclaimer
毒性：标准处理（A）
| biological source | mouse |
| Quality Level | 100 |
| antibody form | purified antibody |
| antibody product type | primary antibodies |
| clone | IF2, monoclonal |
| form | liquid |
| contains | ≤0.1% sodium azide as preservative (100 μg only) |
| species reactivity | human |
| should not react with | mouse |
| manufacturer/tradename | Calbiochem® |
| storage condition | do not freeze |
| dilution | (Frozen Sections (1-5 µg/mL, Immunoblotting (0.5-2 µg/mL, chemiluminescence) Immunofluorescence (1-5 µg/mL) Immunoprecipitation (1 µg/sample) Paraffin Sections (1-5 µg/mL, heat pre-treatment required, ) |
| isotype | IgG2b |
| shipped in | wet ice |
| storage temp. | 2-8°C |
| target post-translational modification | unmodified |
| Gene Information | human ... MDM2(4193) mouse ... Mdm2(17246) |
| 长度(mm) | |
| 宽度(mm) | |
| 高度(mm) | |
| 重量(kg) |
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