RIPAb+ HuR - RIP经验证的抗体和引物组,10ASSAYS,03-102,Sigma

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品牌型号 Sigma 03-102
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产品介绍 Product Description

General description

35 kDa
使用RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)测定法评估RipAb+抗体。 每组RipAb+抗体均包含定量RT-PCR对照引物(RIP引物),通过成功共沉淀特异性RNA靶标(已知这种特异性靶标)对IP结果进行生物学验证。提供了qPCR方案和引物序列,使研究人员能够在实验环境中使用抗体时验证RIP方案。每组还包括阴性对照抗体,以确保RIP反应的特异性。
RipAb+HuR组包括HuR抗体,阴性对照抗体(纯化的兔IgG)和阳性qPCR引物,可扩增人β肌动蛋白(ACTB)cDNA的100 bp片段。HuR和阴性对照抗体以可扩展的“每个RIP”反应大小提供,可用于功能验证沉淀HuR相关RNA。


Immunogen

表位:氨基酸1-13 HuR


Application

RIP裂解液的免疫沉淀:
使用0.5 μg正常兔IgG或抗HuR抗体对MCF7细胞的RIP裂解液(每个IP 2 X 106细胞当量)进行免疫沉淀。沉淀的蛋白质通过电泳分离,转移到硝酸纤维素膜上并用抗HuR(1.0 μg/mL)进行探测。
使用一步IP-Western试剂盒(GenScript目录号L00231)对蛋白质进行可视化(请参见图)。

蛋白质印迹分析:
通过电泳分离3T3/A31裂解液,转移到PVDF膜上,并用HuR,hu(1:500稀释度)探测。使用与HRP偶联的驴抗兔蛋白可视化,并使用化学发光检测系统可视化。(请参见图)。

免疫沉淀分析:
10 ug该抗体从500 ug 3T3/A31 RIPA裂解液中免疫沉淀的HuR(请参见图)。

免疫细胞化学分析:
使用抗HuR(红色)对HeLa,NIH/3T3进行共聚焦IF分析。肌动蛋白丝已用AlexaFluor 488-鬼笔环肽(绿色)标记。细胞核用DAPI(蓝色)染色(请参见图)。
经RipAb+HuR-RIP验证的抗体&引物组方便地包含抗体&,即特异性对照PCR引物。


Physical form

形式:纯化
抗HuR(兔多克隆抗体)。一个小瓶,包含50 μg纯化兔多克隆抗体,溶于100 μL缓冲液中,缓冲液中含有0.05%叠氮化钠和50%甘油中的PBS。在-20°C下液体化。

正常兔IgG。一个小瓶,包含125 μg纯化兔IgG,溶于125 μL含有0.1%叠氮化钠的储存缓冲液。在-20°C下储存。

RIP引物ACTB。一个小瓶,包含75 μL 5 μM人β肌动蛋白(ACTB)特异性引物。在-20°C下储存。
对于: TTG TTA CAG GAA GTC CCT TGC C
REV: ATG CTA TCA CCT CCC CTG TGT G


Analysis Note

RNA结合蛋白免疫沉淀:
使用5 µg正常兔IgG或抗HuR抗体和Magna RIP试剂盒(目录号17-700)对从HeLa细胞制备的RIP裂解液(每个IP 2 x 107细胞当量)进行免疫沉淀。
使用RIP引物ACTB通过qPCR确认了HuR相关RNA的成功免疫沉淀(请参见图)。
请参阅Magna RIP®(目录号17-700)或EZ-Magna RIP(目录号17-701)方案以获取实验详细信息。
对照
包括阴性对照兔IgG抗体和人β肌动蛋白(ATCB)特异性对照引物。


Legal Information

MAGNA RIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany


技术参数 Specifications
biological sourcerabbit
Quality Level100
clonepolyclonal
species reactivitymouse, human, rat
manufacturer/tradenameRIPAb+,Upstate®
technique(s)RIP: suitable,immunocytochemistry: suitable,immunohistochemistry: suitable,immunoprecipitation (IP): suitable,western blot: suitable
NCBI accession no.NP_001410
UniProt accession no.Q15717
shipped indry ice
Gene Informationhuman ... ELAVL1(1994)
长度(mm)
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高度(mm)
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